細(xì)胞名稱：	293FT細(xì)胞, 293FT慢病毒包裝細(xì)胞,  HEK293-FT細(xì)胞，HEK-293FT細(xì)胞，表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞
出品公司：	Thermofisher
目錄號(hào)：	R700-07
種屬來(lái)源:	人
組織來(lái)源:	胚腎
疾病特征:	正常
細(xì)胞形態(tài):	圓形
生長(zhǎng)特性:	貼壁生長(zhǎng)
應(yīng)用：	293FT細(xì)胞主要用于慢病毒包裝，是目前使用*廣泛和效果*好的慢病毒包裝細(xì)胞。
培養(yǎng)基:	293FT細(xì)胞的1L完整培養(yǎng)基配方如下：        DMEM培養(yǎng)基                                                                          900 ml         胎牛血清                                                                                 100 ml         10mM MEM-NEAA（Non-Essential Amino Acids， 100X）           10  ml        200mM L-Glutamine（100x）                                                10 ml       100mM  MEM丙酮酸鈉（100X）                                                     10 ml       青鏈霉素雙抗 （100x）                                                           10 ml       50 mg/ml遺傳霉素G418（100x）                                           10 ml             配置好的完全培養(yǎng)基*好現(xiàn)配現(xiàn)用，沒有用完的可以放置在4度冰箱中，保存時(shí)間可以達(dá)到半年！
生長(zhǎng)條件:	氣相：空氣，95%；二氧化碳，5-10%; 溫度：37 ℃,
傳代方法:	1：2至1：6，每周2次。
凍存條件:	90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲(chǔ)存
支原體檢測(cè):	陰性
產(chǎn)品說明：	1、 293FT細(xì)胞主要用于慢病毒包裝系統(tǒng)，是目前*好的慢病毒包裝細(xì)胞株。 2、 293FT細(xì)胞來(lái)源于293F細(xì)胞，穩(wěn)表達(dá)SV40 large T抗原。細(xì)胞中SV40 large T抗原表達(dá)啟動(dòng)子是CMV啟動(dòng)子，蛋白表達(dá)水平較高而且持續(xù)穩(wěn)定。這使得293FT細(xì)胞成為非常適合于慢病毒包裝的宿主細(xì)胞。 3、 293FT細(xì)胞具有新霉素抗性，該抗性來(lái)自細(xì)胞中含有的SV40 large T穩(wěn)表達(dá)質(zhì)粒（pCMVSPORT6TAg.neo）。該新霉素基因位于SV40啟動(dòng)子的控制下，因此，在傳代293FT細(xì)胞的時(shí)候，需要使用遺傳霉素（也叫新霉素或者G418，工作濃度為500 ug/ml）進(jìn)行抗性篩選傳代。 4、 293FT慢病毒包裝細(xì)胞的完全培養(yǎng)基中，需要包含500ug/ml的遺傳霉素，用于細(xì)胞的篩選維持。 遺傳霉素（G418）的儲(chǔ)存濃度是50 mg/ml, 是工作濃度的100倍。 5、 慢病毒包裝質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的時(shí)候，需要保證細(xì)胞已經(jīng)復(fù)蘇24-48小時(shí)，同時(shí)需要保證293FT細(xì)胞的活力大于90% 。 6、 293FT細(xì)胞是貼壁細(xì)胞，傳代的時(shí)候，需要進(jìn)行胰酶消化。 7、DMEM培養(yǎng)基中本身就含有4 mM的L-Glutamine，但是因?yàn)長(zhǎng)-Glutamine會(huì)隨著時(shí)間降解，所以在完全培養(yǎng)基中，建議補(bǔ)加2 mM的谷氨酰胺。6 mM濃度的谷氨酰胺，能夠更好維持293FT細(xì)胞的生長(zhǎng)，更好的包裝慢病毒。 8、293FT細(xì)胞的1L完整培養(yǎng)基配方如下：        DMEM培養(yǎng)基                                                                          900 ml         胎牛血清                                                                                 100 ml         10mM MEM-NEAA（Non-Essential Amino Acids， 100X）           10  ml        200mM L-Glutamine（100x）                                                10 ml       100mM  MEM丙酮酸鈉（100X）                                                     10 ml       青鏈霉素雙抗 （100x）                                                           10 ml       50 mg/ml遺傳霉素G418（100x）                                           10 ml            配置好的完全培養(yǎng)基*好現(xiàn)配現(xiàn)用，沒有用完的可以放置在4度冰箱中，保存時(shí)間可以達(dá)到半年！

293FT表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞接受后處理

1) 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液 ，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

 2) 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請(qǐng)及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。

 5) 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
 

293FT表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
   
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

293FT表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

 1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請(qǐng)及 時(shí)和我們聯(lián)系。
 
 2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

 3.   用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán) 染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活 力，請(qǐng)拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

 4.   靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì) 胞匯 合度  80%左右時(shí)正常傳代。

 5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

 6.   建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 Procell 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

 7.該細(xì)胞僅供科研使用。